Материалы и методы
Реагенты. Эксперименты в пробирке производились на трех разновидностях человеческой раковой опухоли: HeLa (рак шейки матки), HT-29 и CaCO-2 ( рак ободочной , толстой кишки).
Клетки рака шейки матки выращивались в RPVI, тогда как клетки рака толстой кишки выращивались в DMEM. Обе культуры содержались в растворе, состоявшим из 10% эмбриональной бычьей сыворотки (ЭБС), 100 U/мл пенициллина и 100мкг/мл стрептомицина. Клетки были помещены в инкубатор с увлажнителем воздуха и температурой 37 градусов по Цельсию и с 5% содержанием двуокиси углерода.
Количественный анализ пролиферации. Чтобы оценить эффект, оказываемый Меганином на рост клеток, их размещали в количестве 2х10 в 5-ой степени на ячейку в четыре слоя на 96 микроячеистых платах. После ночной инкубации мы заменяли эту культуру культурой, до этого обработанной Мегамином с различной степенью концентрации. Культура питалась Мегамином с концентрацией 0.5, 5.0 и 50.0 в продолжении 18 часов с непрерывным механическим встряхиванием. После инкубации вещество было гранулировано на центрифуге (5000 г), тогда как культура (плавающая на поверхности) была стерилизована путем фильтрования сквозь 0.45 мкм миллипористые фильтры. Чтобы оценить рост клеток, после 72 часового периода инкубации культуры в Мегамине применялся тест МТТ ( голубой тиазол)а Количественный анализ с помощью МТТ определяет активность дегидрогенизации в жизнеспособных клетках. Для этой цели культура, обработанная Мегамином, добавлялась в каждую ячейку в концентрации 20 мкг/мкл. После 4-х часов инкубации осадок растворялся в 160 мкл диметил-сульфооксида. Поглощение измерялось на ридере ЭЛИСА с шкалой 570 нан. Пролиферация клетки выражалась как соотношение в процентах между клеточной жизнеспособностью клеток, обработанных до этого Меганином, и контрольных клеток (не обработанных).


Добавить комментарий
Вы можете войти чтобы добавить комментарий.